Detección de nuevas mutaciones en componentes de la vía de la proteina C asociadas con un mayor riesgo trombótico.

Author

Medina Badenes, Pilar

Director

Estellés Cortés, Amparo

España Furió, Francisco

Date of defense

2005-04-06

ISBN

8437062306

Legal Deposit

V-1384-2006



Department/Institute

Universitat de València. Departament de Bioquímica i Biologia Molecular

Abstract

La hemostasia es el conjunto de procesos que controlan la fluidez de la sangre y<br/>la integridad del sistema vascular a través de cuatro grandes mecanismos, la<br/>coagulación y anticoagulación controlan la formación del coágulo, mientras que la<br/>fibrinolisis y la antifibrinolisis controlan la eliminación del coágulo. La coagulación<br/>sanguínea requiere mecanismos de regulación que eviten su propagación y extensión de<br/>un modo incontrolado. De hecho, la trombosis es la principal causa de mortalidad y<br/>morbilidad en países desarrollados.<br/>El sistema de la proteína C constituye uno de los principales mecanismos de<br/>anticoagulación, puesto que presenta actividades anticoagulantes, antiinflamatorias,<br/>antiapoptóticas, neuroprotectoras y profibrinolíticas.<br/>Para la activación de la proteína C se requiere el preciso ensamblaje de, al<br/>menos, cuatro proteínas sobre la superficie de la célula endotelial la trombina, la<br/>trombomodulina, la proteína C y el receptor endotelial de la proteína C (EPCR). La<br/>proteína C así activada (APC) se une a su cofactor la proteína S e inactiva a los<br/>cofactores V activado y VIII activado frenando, por tanto, la cascada de la coagulación.<br/>Por ello, como hipótesis planteamos que cualquier cambio que altere la<br/>expresión o el preciso ensamblaje de las proteínas que forman el complejo de activación<br/>de la proteína C, podría dar lugar a una reducción de la generación de APC. Además,<br/>dada la función anticoagulante del sistema de la proteína C, una reducción de la<br/>generación de APC daría lugar a un incremento del riesgo trombótico.<br/>Hemos desarrollado un ensayo para la cuantificación de los niveles circulantes<br/>de APC que es rápido, fácil de llevar a cabo y con un límite de detección lo<br/>suficientemente bajo como para detectar niveles muy reducidos de APC circulante<br/>posiblemente presentes en algunas patologías trombóticas. Mediante este ensayo hemos<br/>determinado que un nivel reducido de APC es un factor de riesgo prevalente e<br/>independiente de tromboembolismo venoso, el cual parece estar genéticamente<br/>determinado.<br/>1<br/>La determinación de la proteína C activada nos ha permitido seleccionar<br/>pacientes con tromboembolismo venoso y con niveles de proteína C activada<br/>persistentemente bajos. En estos pacientes, hemos llevado a cabo la búsqueda de nuevas<br/>mutaciones en los genes que codifican para las proteínas del complejo de activación de<br/>la proteína C, identificando un número considerable de alteraciones en estos cuatro<br/>genes.<br/>Al secuenciar el gen de la trombomodulina identificamos el polimorfismo<br/>C1418T que produce un cambio de Alanina a Valina en el aminoácido 455. Este<br/>polimorfismo está asociado con niveles elevados de APC y con un menor riesgo<br/>trombótico.<br/>Al secuenciar el gen del EPCR identificamos diversas mutaciones. El<br/>polimorfismo A4600G que produce un cambio de Serina a Glicina en el aminoácido<br/>219, determina los niveles plasmáticos de EPCR soluble. A su vez, identificamos el<br/>polimorfismo G4678C en la región 3´ no traducida del EPCR, el cual está asociado con<br/>niveles elevados de APC y con una disminución del riesgo trombótico, como hemos<br/>comprobado también ocurre en los individuos portadores de la mutación factor V<br/>Leiden, uno de los principales factores de riesgo trombótico.<br/>Al secuenciar el gen de la proteína C identificamos la mutación G1435A la cual<br/>produce un cambio de Glutámico a Lisina en el aminoácido 16, un residuo esencial para<br/>que la proteína C ejerza su función anticoagulante. Esta mutación es privativa de una<br/>familia en la que los individuos con historia de trombosis son portadores de la mutación.<br/>La presencia de esta mutación produce una deficiencia de proteína C tipo II.


The protein C anticoagulant pathway plays a crucial role in the control of<br/>thrombus formation. Protein C circulates in plasma as an inactive zymogen that is<br/>converted to the active enzyme, activated protein C (APC) on the surface of endothelial<br/>cells by the thrombin-thrombomodulin complex. Another receptor, the endothelial<br/>protein C receptor (EPCR) binds protein C on the endothelial cell surface and further<br/>enhances the rate of protein C activation. APC is then released from the complex, binds<br/>protein S and inhibits thrombin formation by inactivating coagulation factors Va and<br/>VIIIa.<br/>The protein C pathway also plays a significant role in inflammatory processes,<br/>and displays anti-apoptotic and neuroprotective activities.<br/>Therefore, alterations in the expression or in the assembly of these four proteins<br/>could lead to a reduction in APC levels and to an increase in the thrombotic risk.<br/>We have developed a sensitive, rapid and reproducible assay for the<br/>determination of circulating APC levels. Using this assay, we have observed that<br/>reduced APC levels constitute an independent prevalent risk for venous thrombosis,<br/>which seems to be hereditary.<br/>We have identified several mutations in the proteins that form the protein C<br/>activation complex.<br/>The C1418T (Ala455Val) polymorphism in the thrombomodulin gene is<br/>associated with increased APC levels and decreased risk of venous thromboembolism.<br/>The A4600G (Ser219Gly) polymorphism in the EPCR gene determines the<br/>levels of soluble EPCR.<br/>And the G4678C polymorphism located in the 3´ untranslated region of EPCR is<br/>associated with increased levels of circulating APC and decreased risk of venous<br/>thrombosis, as we also observed in carriers of the factor V Leiden mutation, the most<br/>common genetic risk factor for familial venous thrombosis.

Subjects

577 - Material bases of life. Biochemistry. Molecular biology. Biophysics

Knowledge Area

Facultat de Biològiques

Documents

medina.pdf

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